ALX1 ELISA 秋季特惠
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?span>
本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法，HPLC法作為分析方法，檢測(cè)茶葉中國(guó)合成著色劑的殘留。該處理方法可簡(jiǎn)化樣品的前處理過程，節(jié)省有機(jī)溶劑的使用，操作簡(jiǎn)便。
二、實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)物
檸檬黃（CAS：1934-21-0），莧菜紅（CAS：915-67-3），胭脂紅（CAS：2611-82-7），
日落黃（CAS：2783-94-0），誘惑紅（CAS：25956-17-6），亮藍(lán)（CAS：3844-45-9）。
三、應(yīng)用范圍
本方法適用于茶葉合成著色劑量的HPLC檢測(cè)及確證。
四、實(shí)驗(yàn)材料
SimplyGreen，聚酰胺小柱500mg/6ml（Cat.No.）
五、實(shí)驗(yàn)步驟
1、樣品提取
準(zhǔn)確稱取2.0g紅茶茶葉置于50ml離心管中，加入20ml水，于震蕩器中震蕩提取30min，4000r/min離心5min，上層清液備用。
2、SPE柱凈化
（1）活化：聚酰胺柱使用前用5ml甲醇活化，5ml水平衡。
（2）上樣和洗脫：取5ml備用液過柱，棄去流出液；用3ml水淋洗，再用足量甲醇-甲酸溶液（6:4，v/v）淋洗至流出液透明，棄去流出液，抽干小柱；用5ml5%氨水甲醇洗脫，收集洗脫液。（整個(gè)上樣、洗脫過程控制流速在1ml/min內(nèi)）。
（3）上機(jī)測(cè)試：將洗脫液定容至5ml，取1ml經(jīng)0.22um水系慮膜過濾，供上機(jī)測(cè)試。
3、HPLC條件
設(shè)備：Waters Alliance 2695
色譜柱：InertSustain-C18（4.6mm×250mm，5um）
檢測(cè)器：Waters 2996紫外檢測(cè)器
檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm
流動(dòng)相：A：甲醇 B：0.02mol/L乙酸胺緩沖溶液
表1梯度洗脫條件
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時(shí)間/min
|
A（%）
|
B（%）
|
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--
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5
|
95
|
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10.0
|
20
|
80
|
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18.0
|
60
|
40
|
|
25.0
|
60
|
40
|
|
25.1
|
5
|
95
|
|
35.0
|
5
|
95
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流速：1.0ml/min
進(jìn)樣體積：20ul
六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
1、10.0mg/kg茶葉中合成著色劑的添加回收結(jié)果
表2 10.0mg/kg茶葉中合成著色劑的添加回收結(jié)果
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名稱
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回收率（%）
|
平均回收率（%）
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RSD（%）
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|
1
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2
|
3
|
|
檸檬黃
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90.5
|
88.5
|
88.9
|
89.3
|
1.2
|
|
莧菜紅
|
107.7
|
107.1
|
106.6
|
107.1
|
0.5
|
|
胭脂紅
|
109.4
|
107.1
|
110.0
|
108.8
|
1.4
|
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日落黃
|
104.4
|
106.1
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99.0
|
103.2
|
3.6
|
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誘惑紅
|
107.8
|
108.2
|
105.9
|
107.3
|
1.1
|
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亮藍(lán)
|
87.2
|
93.4
|
89.2
|
89.9
|
3.5
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2.添加水平為10.0mg/kg茶葉中合成著色劑檢測(cè)的液相色譜圖
圖1添加水平為10.0mg/kg茶葉中合成著色劑檢測(cè)的液相色譜圖
